常用固定液的性质、用途

常用固定液的性质、用途和配置

1．单一固定液的性质和用途

（1）乙醇（C2H5OH）（ethylalcohol） ：又名酒精，可沉淀白蛋白、球蛋白、核 蛋白， 后者易溶于水， 所以经酒精固定的标本对细胞核染色不良。 酒精可溶解脂肪、 类脂体， 所以不能用酒精固定脂肪。酒精可沉淀肝糖，但仍可溶解于水，因此肝糖经酒精固定后不能 在低于 70％酒精中保存。单独固定使用酒精的浓度应为 95—100％。无水酒精渗透力较差， 并且能使组织收缩，在与醋酸、氯仿混合使用时，可增强它们的穿透力。酒精除固定作用外，还具有硬化和脱 水的作用，固定后的组织可保存于 70％酒精中，所以酒精在制片过程中用途很大。无水乙 醇容易挥发，又容易吸收空气中的水分，所以瓶盖必须塞紧，为了吸去其中水分，最好在无 水乙醇瓶内放入少量无水硫酸铜粉末。酒精是一种还原剂，不能与重铬酸钾、锇酸等氧化剂 混合使用。

（2）甲醛（HCHO）（formeldehyde）：是一种气体，溶于水成为甲醛水溶液或称，一般使用浓度为 10％（formalin）液，其配法是取市售的甲醛液 10ml 与 90ml 蒸馏水混合即可，实际上其含量只有 4％甲醛。这样的配法已成为一般实验室常用 的惯例。

甲醛不能沉淀白蛋白及核蛋白，但能与蛋白质化合。它是一种应用广泛，使用 简单的固定液，具有穿透力强、固定均匀、组织收缩小、硬度适当，适用于一般器官组织的 固定及保存。尤其对脂肪、神经组织固定效果较好。更适于病理组织的制片及大体积标本的 保存，一般组织需固定 24 小时以上，固定后的组织可移入 50％酒精中逐步脱水。

甲醛是一种强还原剂，不能与铬酸、重铬酸钾、锇酸等氧化剂混合，因极易被 氧化

为甲酸。在配混合固定液时，如海利氏液等需临用前再加入，24 小时后失效。

甲醛由于长期贮存，特别是低温气候，容易产生多聚甲醛，即溶液中的白色沉 淀，在高温下又成为甲醛。不纯的甲醛易产生甲酸，使溶液变为酸性，影响核的染色。所以 在备用的中加入小量的醋酸钙、碳酸镁或大理石作为中和剂。可用下法配制 10％ 中性甲醛溶液， pH 为 7.0 左右：

40％甲醛 100ml

蒸馏水 900ml

磷酸二氢钠（NaH2PO4·H2O） 4.0g

磷酸氢二钠（Na2HPO4） 6.5g

甲醛醋酸钙溶液：

40％甲醛 10ml

醋酸钙 2g

蒸馏水 加至 100ml.

（3）醋酸（CH3COOH） （aceticacid） 纯醋酸在低温时结成冰状故又名冰醋酸，约在 17℃时融化，能和水及乙醇混合。使用浓度为 0.3—5％，它能很好地沉淀核蛋白，对 染色质的固定效果很好。 醋酸对染色体的保存能接近生活状态， 因此在固定染色体的

固定液 中几乎都含醋酸。醋酸的穿透力很强。它能使组织膨胀，常与其他药剂配合使用，起抑制其他固定剂对组织收缩的作用。

醋酸破坏线粒体和高尔基体， 所以在线粒体和高尔基片及固定液中都不用 醋酸。

（4）苦味酸（C6H2（NO2）3OH）（picricacid） ：是一种强酸，呈黄色结晶， 溶于水、乙醇、苯和二甲苯。干燥时能自燃，爆炸，所以需湿性保存。一般配成饱和水溶液备用（100ml 蒸馏水加 1.2g 苦味酸）。

苦味酸能沉淀蛋白质，对胞质固定较好。苦味酸的穿透力很慢，能使组织强烈 收缩，一般都与醋酸等药剂配合使用。苦味酸固定的组织会出现黄色，可在低度酒精中加入 少量碳酸锂饱和水溶液，洗去黄色。如遗留少许黄色在组织中，对染色无影响。

（5）重铬酸钾（K2CrO7） （potassium dichromate） ：呈橙红色结晶，可溶于水，有毒，是强氧化剂，不应和乙醇混合。 它穿透力强，能使蛋白质变为不溶性，能保持细胞质的结构与生活状态相仿，并用于线粒体 和高尔基复合器的固定，但需与甲醛、氯化汞等混合使用，是细胞学良好的固定剂。重铬酸 钾固定的组织需经流水冲洗 12—24 小时。

（6）铬酸（H2CrO4） （chromicacid） ：为强氧化剂，是一种弱酸，呈红色或浅 褐色结晶，极易潮解，所以最好配成 1％的水溶液保存。它是强烈的沉淀剂，不单独使用。 硬化程度中等。固定肝糖 的效果优良， 它使肝糖不溶于水。 在固定线粒体和高尔基复合器的固定液中都含有 铬酸成分。 铬酸穿透力较慢，不使组织收缩。固定后的组织需经流水冲洗 12 小时以上， 洗去铬酸，否则会发生沉淀，影响染色。

（7）氯化汞（HgCl2） （mer cury bichloride） ：又称升汞，呈白色针状结晶，能升华，是一种极毒的药品，对粘膜有 腐蚀作用，使用时需特别当心。

氯化汞能沉淀一切蛋白质，使蛋白质变性不溶于水，对一般染色效果很好，对 固定线粒体和高尔基体的效果也很好。 氯化汞穿透力较弱，收缩力较大，所以一般与醋酸、甲醛等混合使用。经氯化 汞固定的组织会产生氯化亚汞沉淀， 所以组织或切片需用 0.5％碘酒处理 3—5 分钟， 除去沉 淀物，然后用 2％硫代硫酸钠水溶液去碘处理 1—2 分钟。

（8）四氧化锇（OsO4） （osmiuln tatroxide） ：又名锇酸（osmicacid） 。是一种淡黄色结晶体，为强氧化剂，不可与酒 精、甲醛混合，在配制使用过程中瓶皿需特别洁净，固定浓度为 1—2％水溶液。需用棕色 瓶贮存于 4℃冰箱内。

锇酸是固定脂肪的最好固定剂。穿透速度很慢，能均匀固定蛋白质，能保持细 胞生活时形态，不引起细胞收缩，对细胞质的保存较好，特别适用于线粒体、高尔基复合器 的固定。固定后的透明处理，用苯为透明剂可得良好的切片效果。 锇酸价格极贵，毒性高，蒸气易损伤眼睛及粘膜，使用时应加小心。 锇酸固定的组织切片，不易被苏木精着色，需经过漂白处理。

Lacour 漂白液的配制：

20％H2O2 10ml

80％酒精 30ml

将切片置此液中漂白 4—12 小时，移入 80％酒精、70％酒精、50％酒精中各 2 分

钟，蒸馏水充分洗涤后，再进行染色。

以上简单的固定液各有优缺点，如无水酒精可固定肝糖，但不能固定脂肪，因 脂肪易溶于酒精。 而锇酸能固定脂肪， 氯化汞对蛋白质固定较好， 冰醋酸可以固定核蛋白等， 它们只是对细胞的某些成分固定较好，而不能将所有成分都保存下来。如果互相配合使用， 则能取长补短，得到较好的固定效果，只有了解药品的性质，才能清楚各固定液的性能。下 面介绍几种常用的混合固定剂。

2．混合固定液的配制和性能

（1）包音氏（Bouin’s）固定液 ）

苦味酸饱和水溶液 75ml

甲醛（40％） 25ml

冰醋酸 5ml

本液在使用前配制。 包音氏液为常用的良好固定剂， 适用于无脊椎动物， 组织学、 胚胎学均可应用。 渗透力迅速，固定均匀，组织收缩少。小块组织固定 2—12 小时，一般组织固定 12—24 小 时，固定后用 50％酒精洗涤数次。 此液固定的组织适于苏木精、伊红等染色。用马瑞氏三色染色，能得艳丽的图 像。

（2）任克氏（Zenker's）固定液 ）

重铬酸钾 2.5g

氯化汞 6g

蒸馏水 100ml

冰醋酸 5ml

配制时将重铬酸钾、氯化汞溶于加温的蒸馏水，冰醋酸临用前加入。此固定液 适用于细胞学、组织学的研究工作。固定时间一般需 12—24 小时。固定后要用流水冲洗 12 小时，用碘去汞。此液固定的组织适于一般染色，细胞核、细胞质染色较为清晰。

（3）海利氏（Helly's）液

重铬酸钾 2.5g

氯化汞 6g

蒸馏水 100ml

40％甲醛液 5ml

此固定液是将任克氏配方中的冰醋酸换成甲醛液， 甲醛也在用前加入， 因在加 入甲醛 24 小时后即生成沉淀而失效。固定时间 12—24 小时。海利氏液为骨髓、脾、肝等造 血器官的较好固定剂。此液亦可保存线粒体，染色前需用碘去汞。

（4）苏萨氏（Susa's）[海登哈音氏（Heidenhain's）] 液：

氯化汞 4.5g

氯化钠 0.5g

40 ％甲醛液 20ml

三氯醋酸 2g

冰醋酸 4ml

蒸馏水 80ml

将 4.5g 氯化汞和 0.5g 氯化钠溶于 80ml 蒸馏水中保存。临用前取此液 20ml， 加入三氯醋酸 0.5g，40％甲醛 5ml，冰醋酸 1ml，混合使用。

此液含有三氯醋酸和氯化钠，对较硬的组织有软化作用，如皮肤、蛔虫卵、昆 虫幼虫等角质层较厚的组织，食道、胃均能适用。它具有渗透快、收缩小的优点。小块组织 固定 3—5 小时；大块组织，如皮肤固定 12—24 小时。固定后可直接入 95％酒精洗涤，勿 入水或低度酒精，否则易使胶原纤维膨胀。切片在染色前，用碘去汞。

（5）卡诺氏（Carnoy's）液

纯酒精 60ml

氯仿 30ml

冰醋酸 10ml

此液穿透力强，对核固定优良，是细胞学制片常用的固定液。酒精能固定胞浆 及沉淀肝糖，冰醋酸能固定染色质并防止酒精过度硬化和收缩，氯仿可增加渗透力。小白鼠 的睾丸和马蛔虫的子宫固定需 30—50 分钟，稍大一些的淋巴结、胸腺等组织，可固定 1—2 小时。时间太长易使组织过度硬化，不利于切片。固定后直接入 95％酒精洗涤，然后脱水、 透明、包埋。

（6）酒精、甲醛（简称 A．F）液

95％酒精 90ml

40％甲醛 10ml

如需要可加入 0.5g 的醋酸钙使其呈中性。此液有固定兼脱水的作用，用于病 理快速诊断的制片，也适于肥大细胞的固定。2—3mm 厚的病理组织在 50℃固定 40 分钟， 一般室温固定 12—20 小时，固定后可直接入 95％酒精脱水。

总之， 固定液的种类很多， 用时可查阅制片方面的书籍。 首先要根据实验目的， 选用固定液。 但应用时必须首先了解各种混合固定液中的组成成分能否预先混合， 固定后是 否需要洗涤，然后再开始配制固定液。

固定液和保存液

用固定液固定动植物整体或它的一部分组织和气管等，能保存组织内细胞的形态、结构及其组成，尽量使它近于生活状态。固定液一般有防腐和保存的作用，分为单纯固定液

和混合固定液。单纯固定液中最重要的有乙醇、、醋酸、苦味酸、铬酸、重铬酸钾、升汞等，前两种固定液是中学生物实验室常用的。单纯固定液的优点是简便，缺点是有一定的局限性，不易达到理想的固定要求。混合固定液有几种不同的药液按一定的比例混合而成，使各自的优缺点相互补充，成为较完美的固定液。这种固定液的制备虽比较麻烦，但是效果比较好。常用的混合固定液是醋酸-酒精混合液、-醋酸-酒精液、包因氏固定液等。

常用的保存液大致跟固定液相同，主要是、酒精、甘油以及由这些药物按比例配制成的各种混合液。有时按特殊保存的需要，再保存液中增加某些药品（如原生标本的保存液）。

1、

在固定组织标本时杀菌能力强，所以防腐性强，渗透力大，固定得快。永固定精细的解剖标本时，要跟甘油、酒精、石炭酸等混合使用。

固定液常用的浓度是5～10%（根据材料的大小、性质和数量而定）。

保存液常用的浓度是5～10%。用作保存液，效果好且价格低廉。

在配制溶液（固定液或保存液）时，应将37～40%的甲醛作为整个溶质来配。例如配制5%是取市售37～40%甲醛溶液5毫升跟95毫升蒸馏水混合。实际上甲醛含量只有1.9～2%，这样的配法已成为一般实验室常用的惯例。

注意事项：

（1）业在长期贮存中会产生蚁酸，可适量的加入碳酸钙或碳酸镁等碱性物质进行中和。

（2）业作为保存液会慢慢挥发而致使浓度降低，并且液再保存中往往形成多聚甲醛，使浸液变浊，影响观察。所以，根据一定保存期的情况，可适当增加液的浓度或更换新液，以防标本变坏。其中如有白色沉淀物，加热后可使它溶解。

（3）市售的液常带有酸性，能腐蚀石灰质，因此，最好不用液浸制有石灰质外壳的动物。

2、酒精（乙醇）

酒精也是常用的固定液，它有强烈的杀菌作用，对组织材料的渗透力较大，固定的快。但是，它的脱水作用较强，在高浓度的酒精中容易使材料显著硬化和收缩。一般用于固定浸制标本材料，分一级或二级固定，即70%或50%与70%的酒精。有些小型材料或精细的解剖材料，最好用二级或三级固定，即用50%、70%或50%、60%、70%的酒精，最后再进行保存。从经济效果来考虑，一般酒精应跟液等固定液混合使用。

市售的工业用酒精浓度是95%左右，因此用时要重新配制。保存液的浓度通常是70%。

注意事项：

（1）在固定材料时要注意固定的效果，小型材料一般放在固定液中固定。大型材料必须先往体内注射一部分固定液，再放入固定液中，防止材料内部腐怀变质。用液固定也是如此。

（2）高浓度的酒精有脱水、脱脂作用。含有多量脂肪或拟脂标本（如脑、脊髓）等都不宜用较高浓度的酒精作保存液。

（3）为了防止酒精使标本硬化，保存一些精细的材料或解剖标本时，因加入少量甘油，因为甘油具有润软组织的作用。

（4）忌跟铬酸、锇酸和中铬酸钾等氧化剂配合。

3、醋酸

醋酸即乙酸，纯醋酸在低于16.7摄氏度时会凝成冰状固体，所以叫冰醋酸。醋酸能很快穿透组织，因为它不能沉淀细胞质中的蛋白质，组织不会硬化。一般常跟酒精、、铬酸等容易引起组织变硬和收缩的液体混合，以起到相互抵消的作用。

醋酸固定液的常用浓度是0.3%～5%。

4、苦味酸

苦味酸是一种黄色结晶，能溶于水（溶解度是0.9～1.2%）、酒精（溶解度是4.9%）和苯（溶解度是10%）。苦味酸也能沉淀一切蛋白质，穿透较慢，固定后，组织收缩明显，但不使组织硬化。

苦味酸固定液可以在100毫升蒸馏水中加入苦味酸约1.5克，制成饱和水溶液。固体苦味酸易爆，长制成饱和水溶液保存。

5、升汞

升汞又叫氯化汞，是白色粉末，以针状结晶为最纯。通常固定时用饱和水溶液，有时也用70%酒精作溶剂，不单独用作固定剂。升汞的穿透力较弱，通常用于小型材料，对蛋白质有强烈的沉淀作用，硬化程度中等。

固定液用饱和溶液，浓度约为7%。

6、卡尔氏（Carl's）液

配方

95%酒精 170毫升 蒸馏水 280毫升

60毫升 冰醋酸 20毫升

冰醋酸要在临用前加入。

这时极好的昆虫保存液，常用来杀死和保存小型、身体柔软的种类入螨、蜈蚣、马陆等。在这溶液里加入少量甘油，能防止虫体变脆。

7、卡诺氏（Carnoy's）液

配方

纯酒精 6份 冰醋酸 1份

氯仿 3份

这种固定液能固定细胞质和细胞核，尤其适宜于固定染色体，所以多用于细胞学的质片，还用来固定腺体、淋巴组织以及原生动物的胞壳等。这种固定液穿透得快，因此一般小块组织固定20～40分钟，大型材料不超过3～4小时。固定后用95%或纯酒精洗涤，换液两次，移到石蜡中或用80%酒精保存。

8、吉尔桑氏（Gilson）液

配方

60%酒精 50毫升 冰醋酸 2毫升

80% 7.5毫升 升汞 10克

蒸馏水 440毫升

这是常用的固定液，适用于肉质菌类，特别是柔软胶质状的材料如木耳等，也广泛用于无脊椎动物和一般组织和蛙胚的固定。固定时间18～20小时，然后用50%酒精冲洗材料，除去升汞。如果用水冲洗，会使材料膨胀。混合液保存24小时后失效。

9、--醋酸--酒精溶液（FAA）液

配方

50%酒精 85毫升 10毫升

冰醋酸 5毫升

这种固定液适用于固定一般植物茎、叶组织，昆虫和甲壳类动物。液组织在这溶液里固定12小时，木质化组织要固定1周，材料也可在此液中长期保存。固定后的材料放在50%酒精中冲洗1～2次。

10、克来宁堡氏（Kleinenberg's）液

配方

在20%硫酸水溶液内加入苦味酸，直到饱和。

这种固定液适用于鸡胚的固定，也用于许多小型海洋生物的固定。

11、包因氏（Bouin's）液

配方

苦味酸饱和水溶液 75毫升 冰醋酸 5毫升

25毫升

这是常用的良好固定剂，渗透迅速，固定均匀，组织收缩少，染色后能显示一般的微细结构。一般动物组织、无脊椎动物的卵和幼虫以及一般组织学、胚胎学的材料，如植物组织的根尖和胚囊都可用它来固定。一般组织固定24～48小时，小块组织固定4～16小时，动物材料能在这种固定液中长期保存。固定后，动物材料用70%酒精冲洗净苦味酸，到无黄色为止（用酒精冲洗时，加几滴氨水，可加快除去黄色）；植物材料用20%酒精冲洗几次。

12、绍丁氏（Schaudinn's）液

配方

甲液 升汞饱和水溶液 66毫升

95%酒精 33毫升

乙液 冰醋酸 1毫升

甲、乙液要在临用前混合。

这种固定液适用于固定有鞭毛的原生动物、植物的精子和游动孢子等。材料如制作涂布装片，可在40摄氏度下固定10～20分钟。

13、眼球固定液

配方

丙酮 40毫升 冰醋酸 1.5毫升

升汞 2克 甲醛 10毫升

蒸馏水 40毫升

这种固定液适用于眼球的固定，并可在固定液中长期保存。

14、纳瓦兴氏（Nawaschin's）液

配方

甲液 铬酸 1.5克 冰醋酸 10毫升

蒸馏水 90毫升

乙液 40毫升 蒸馏水 60毫升

临用前将等量甲、乙液混合。

高等植物有丝材料适宜在这种固定液里固定或长期保存。

15、绿色标本保存液

配方一

硫酸铜 5克 水 95毫升

这种保存液适用于绿色植物和一切植物绿色部分的保存。植物放入硫酸铜液后，由绿变黄，再由黄变绿。这时取出材料，用清水漂洗干净，浸在5%液内长期保存。

配方二

硫酸铜 0.2克 95%酒精 50毫升

10毫升 冰醋酸 5毫升

水 35毫升

先把硫酸铜溶于水中，然后加入配方中的其他组分。绿色标本能长期的贮存在该液中。

配方三

醋酸铜 15～30克 50%醋酸 100毫升

在50%醋酸中逐渐加入醋酸铜，直到饱和。适用时取原液1份，加水4份，即成稀释的硫酸铜溶液。

这种保存液适用于表面有蜡质、蛙质、质地较硬的绿色植物保色。加热稀释到醋酸铜溶液，放入植物，轻轻翻动，到植物由绿转黄再转绿色时取出植物，用清水漂洗后，浸入5%液内保存。

16、红色标本保存液

配方一

甲液 硼酸 3克 4毫升

水 400毫升

乙液 亚硫酸 2毫升 硼酸 10克

水 488毫升

把红色的果实浸在甲液里1～3天，等果实由红色转深棕色时取出，移到乙液里保存，同时在果实内注入少量乙液。

配方二

氯化锌 2份 1份

甘油 1份 水 40份

先把氯化锌溶解在水里，然后加入配方中其他组分。溶液如果浑浊而有沉淀，应过滤后使用。红色果实能在此液中保存。

17、黄色标本保存液

配方一

甲液 硫酸铜 5克 水 95毫升

乙液 6%亚硫酸 30毫升甘油 30毫升

95%酒精 30毫升 水 900毫升

先把植物标本在甲液中浸1～2天，取出洗净后，浸入乙液中保存，同时在果实内注入少量乙液。

配方二

6%亚硫酸 568毫升 80%酒精 568毫升

水 450毫升

植物材料能在这种保存液中长期保存。

18、紫色标本保存液

配方一

95%酒精 20毫升 20毫升

水 60毫升

使用时，取1份原液加9份水稀释，植物材料能在这溶液中保存。

配方二

食盐饱和水溶液 30毫升 水 175毫升

20毫升 甘油 少量

植物材料能在这溶液中保存。

19、白色标本保存液

配方一

甲液 5%硫酸铜溶液

乙液 1～4%亚硫酸溶液

全白色植物材料能浸在乙液中保存。杂有绿色的白色植物材料先浸在5%硫酸铜溶液内1～3天，用清水漂洗后浸在乙液中保存。

配方二

氯化锌 32克 95%酒精 125毫升

水 1000毫升

把氯化锌溶于水中，再加入酒精。植物材料能在这溶液中保存。

20、绿色幼虫保存液

甲液 4毫升 醋酸铜 1克

钾 1克 水 100毫升

乙液 甘油 20毫升 醋酸钾 10克

1毫升 水 100毫升

先把昆虫幼虫放在80摄氏度热水中烫死，晒干后放在甲液中固定1星期左右，最后放入稀释一倍的乙液中保存。

配方二

甲液 95%酒精 90毫升甘油 2.5毫升

2.5毫升 冰醋酸 2.5毫升

氯化铜 3克

乙液 冰醋酸 5毫升 4毫升

水 100毫升

将绝食1～2天的幼虫，用注射器从肛门向体内注射甲液，12小时后转入乙液内保存，约20天更换1次乙液。

21、黄色幼虫保存液

甲液 苦味酸饱和液 10毫升 冰醋酸 5毫升

2.5毫升

乙液 与绿色幼虫保存液配方二乙液相同

用注射器从幼虫肛门内注入甲液，12小时后转入乙液内保存。

22、红色幼虫保存液

硼砂 2克 50%酒精 100毫升

昆虫幼虫能在这溶液中保存。

23、动物内脏原色保存液

甲液 200毫升 钾 15克

醋酸钾 30克 水 1000毫升

乙液 甘油 200毫升 醋酸钾 100克

麝香草酚 2.5克 水 1000毫升

先把材料放在甲液内固定，固定时间根据材料的大小而定，一般需1～5天。当材料失去自然色泽而呈暗褐色时，用手轻轻挤压，直到没有淡红色血水流出时，取出材料，用清水冲洗，在浸在85%酒精中3～24小时（不能太久，否则易破坏色素），到血色恢复后，浸在乙液中保存。