婴儿乳粉中的乳铁蛋白检测研究进展

Technology科技分析与检测婴儿乳粉中的乳铁蛋白检测研究进展□ 李 琪　吕珍珍　张 娴　德阳市食品检验重点实验室　德阳市食品药品安全检验检测中心摘　要：乳铁蛋白是一种具有多种生物活性功能的铁结合糖蛋白，是母乳中含量丰富的天然成分，具有广谱抗菌、抗氧化、抗癌、调节免疫系统等强大生物功能，是一种高效营养添加剂，被广泛应用于婴幼儿乳粉中。在婴幼儿配方奶粉中添加使用牛乳铁蛋白，使其营养成分更接近母乳，对婴幼儿的生长发育极为重要。关键词：婴儿奶粉；乳铁蛋白；检测参差不齐，由于乳铁蛋白价格昂贵，目前，市场上的婴幼儿乳粉质量用高压直流电场作为驱动达到液相分很多不良商家出产的乳粉中添加量远离的目的，具有操作简单、灵敏度较远低于标示水平，甚至标示添加却根高等优点，但需要解决毛细管壁对目本没有添加却以高昂的价格欺骗消费标物质乳铁蛋白的吸附导致的重复性者。由于我国没有关于婴幼儿乳粉中差的问题，且检测结果受样品复杂基乳铁蛋白检测的国家标准，导致管控质的影响较大。更加困难，造成市场乱象。3　表面等离子共振技术底含不含乳铁蛋白，含量有多少，是市售的婴幼儿乳铁蛋白产品中到种金属介质界面的入射光线可以引起以临界角入射到不同折射率的两否还有活性是广大消费者关心的问题，金属产生自由的电子共振，电子吸收亦是食品质量安全相关负责人员需要光能量使反射光大幅减弱，能够使反去解决的问题。目前，报道的乳粉中射光在一定角度内完全消失的入射角乳铁蛋白检测方法包括酶联免疫法、称为 SPR高效毛细管电泳法、率变化而变化，而折射率的变化又与角。SPR角随介质表面折射高效液相色谱法、高效液相生物传感测定法、介质表面结合的分子质量成正比，因法等。-质谱联用此可以通过对生物反应过程中1　酶联免疫法的动态变化获取生物分子之间相互作SPR角用的特异信号达到检测的目的。基于特异性反应的检测方法，具有反应灵酶联免疫法是一种基于抗原抗体表面等离子体共振技术的生物传感免敏、特异性强等优点。在微孔板中包疫测定法，无需进行标记便可实时、被抗乳铁蛋白抗体（一抗），加入目自动测定婴儿配方奶粉中低含量乳铁标物乳铁蛋白后，乳铁蛋白与一抗结蛋白，但实验温度及样品组成影响测合，再加入乳铁蛋白抗体（二抗）与定结果，仪器设备造价也较为昂贵。之形成夹心结构，最后加入显色剂，4　高效液相色谱法利用酶标仪测定特定波长的吸光度值，其吸光度值与乳铁蛋白含量成正比，不同的色谱柱对不同组分因分配系数高效液相色谱法（HPLC）是利用可绘制标准曲线达到定量检测样品中及吸附力大小的不同而被分离，并被乳铁蛋白浓度的目的。酶联免疫法虽检测器识别的技术，其中由非极性固然灵敏度高，但通常需要进行多重的定相和极性流动相所组成的液相色谱孵化、洗涤和清洗，操作较为繁琐，体系的反相高效液相色谱是且所用抗体及抗抗备不易，价格应用最为广泛的一种液相色谱法，优HPLC 中昂贵，不适用于大批量的样品分析。点是反应灵敏、结果准确可靠、重复2　高效毛细管电泳法性好，但缺点是对样品的纯度要求较高，往往需要经过复杂的前处理过程越大，样品分子扩散系数越小或分子量才能进样。婴幼儿乳粉属于一种成分蛋白质等生物大分子通常具有扩散系毛细管柱的分离柱效越高，肤类、相当复杂的食品基质，目前常用的乳数小的特点，这使得自19世纪80年粉中的乳铁蛋白检测方法中多使用肝代中后期迅速发展以来，高效毛细管素亲和柱来对乳粉中的乳铁蛋白进行电泳逐渐成为一种常用的分离检测蛋分离提纯，但肝素亲和柱价格昂贵，白质的手段。高效毛细管电泳法大多且不能多次重复使用，造成了检测成数使用石英材质的毛细管为分离通道，本的大幅度升高，不能满足于大规模市场监控检测的要求。106 食品安全导刊 2019年3月5　高效液相-质谱联用法比来对待测物进行准确定性，通常与质谱仪通过测量特定离子的质核高效液相色谱或气相色谱仪等联用来达到精确定量的目的。由于蛋白质分子质量太大，在对蛋白质的分析中，通常将其利用各种手段如胰蛋白酶水解为肽段的混合物，再通过对其中的特异性肽段的测定来检测该蛋白。有报道称研究人员将蛋白质组学技术、同位素标记技术与高效液相色谱法相结合来检测乳制品中的乳铁蛋白-质谱先利用碱性胰蛋白酶水解牛乳铁蛋白：酶，确定乳铁蛋白的特异性肽段， 配合稳定同位素肽段作为内标，实现乳铁蛋白定量检测。好、回收率高，但是需要将蛋白质大分液相质谱法结果灵敏可靠、重复性子打碎成氨基酸小分子，通过特定的氨基酸片段来进行定性和定量，此时蛋白质已经变性，不利于待测样品中对于乳铁蛋白是否有活性的判断，且设备昂贵，对操作人员的专业性要求更高。6　结语中是一种性能优异的营养强化剂，具乳铁蛋白应用于婴儿乳粉的添加有增强免疫能力、调节肠胃功能、强化铁吸收等多种生物学功能，随着人们对乳铁蛋白的生物学机理等研究不断深化，乳铁蛋白的检测技术也在日新月异地发展。现有的检测方法大多只针对牛乳及制品，对动物源性不同的乳制品如羊乳、骆驼乳中的乳铁蛋白检测和对于乳铁蛋白有无活性，活性乳铁蛋白含量测定的相关报道较少。随着消费者对乳铁蛋白生物学功能的进一步认识和重视，建立一种适应性强且准确、快捷、 经济、操作简便的乳及乳制品中乳铁蛋白检测方法十分必要，有利于推进对乳铁蛋白的进一步研究，满足市场监管需要，保护消费者权益。