实验失败总结
我们的实验方法:
一、基本原理
利用茜素红与三聚氰胺反应,通过紫外分光光度法,测定反应物的吸光度值,从而快速检测乳制品中三聚氰胺的残留。实验研究以牛奶为样品,乙腈为提取剂
二、实验药品与仪器
三聚氰胺(分析纯)、乙腈(分析纯)、茜素红(分析纯)、牛奶样品、蒸馏水
分光光度计、电子分析天平、100mL容量瓶、涡旋震荡仪、离心仪、离心管(10mL)、锥形瓶(250mL)、10mL比色皿6支、移液
三、实验基本步骤
1、配制浓度为0.008%的茜素红(实称茜素红0.0083g)水溶液100mL以及体积比为1:溶液(下称基液)1L备用;
2、配制浓度分别为10μg/mL、20μg/mL、30μg/mL、40μg/mL、50μg/mL的三聚氰胺标(体积比=1:3)溶液各100mL;
3、往体积比为5mL:2mL的红混合溶液中加入1mL0.1mol/L的氢氧化钠溶液,充分混匀后在250~700nm范围内进行基线扫描操作(所用溶液编为0号溶液);
4、取5mL50μg/mL的三聚氰胺标准溶液,与2mL茜素红溶液及1mL0.1mol/L的氢氧化钠溶液在比色管中充分混合,室温下显色10min,替换外侧比色皿中的混合液,开始扫描操作,找出最大吸收峰的位置(在可见光区),然后将外侧溶液取出,倒去一半,用0号溶液稀释至原体积,再进行一次扫描,比较两次吸收峰的强度变化,确定实验所用最大吸收波长;
5、按从低浓度到高浓度的顺序分别取5mL标准溶液,与2mL茜素红溶液以及1mL0.1mol/L的氢氧化钠溶液在比色管中充分混合,室温下显色10min,以0号溶液为参照,在实测最大吸收波长下进行测定,记录下吸光度,从而获得工作曲线;
6、取25mL牛奶样品,往里添加75mL乙腈,室温下震荡提取20min,将混合液2000rpm条件下离心10min,归并上清液于一只50mL容量瓶中,精确定量;
7、移取5mL上清液,与2mL茜素红水溶液以及1mL0.1mol/L的氢氧化钠溶液充分混合,在实测最佳吸收波长条件下进行测定,记录吸光度;
8、重复操作3次,求平均值,带入工作曲线中,获得牛奶提取液中三聚氰胺的浓度,今儿换算得到牛奶样品中三聚氰胺的含量。
五、主要参考资料
《紫外分光光度法快速检测乳制品中三聚氰胺残留的研究》曾维才,张,高《食品与发酵科技》第47卷第2期
失败总结
1、本实验最终以没能做出准确的标准工作曲线而失败,工作曲线基本可断定不呈线性。失
败原因主要是对三聚氰胺和茜素红的性质了解不够透彻,导致实验过程中出现了种种问题,而知识面的狭窄又使得问题无法及时解决,最终导致了实验的失败。
2、虽然实验失败了,但是我们仍然有所收获。比如,为了防止三聚氰胺的碱性对实验的影响,我们通过请教老师与自己的思考,向混夜中加入适量的氢氧化钠以排除其干扰,从而解决了这一问题。
3、在实验中发现,不同浓度的三聚氰胺混夜加入茜素红后,混夜的颜色用肉眼观察就可以看到较明显的差异。我们可以据此大胆猜想,用茜素红显色测三聚氰胺含量的方法可以在可见光的光学仪器上得以实现,从而大大降低了仪器成本,测量时间也会显著减少。
4、虽然实验前查阅过不少文献,但是按照文献上的方法实验时,却没能得到合意的实验结果,由此可以看出生搬硬套文献是十分不明智的行为,文献中介绍的方法有很多细微因素是我们不了解的,另外文献也不一定就是绝对正确的。所以今后参照文献时要格外慎重,可以将其当成学习的手段和方法,切不可生搬硬套。