河北中医药学报
・34・JOURNALOFHEBEITCMANDPHARMACOLOGY
2007年 第22卷 第2期Vol122 No12 2007
方药研究
怀牛膝药材中牛膝总甾酮的含量测定河北医科大学中医学院
刘 姣 李 清 曹秀莲 彭 超△(石家庄 050091)
提要 目的:建立牛膝总甾酮含量测定的新方法。方法:采用中性氧化铝柱提取分离牛膝总甾
酮,在243nm波长处测定样品吸收度。结果:总甾酮在0103～0107mgΠmL范围内线性关系良好,其回归方程为:Y=010311+010105x,r=019998。结论:本方法操作快速、简便、准确,可作为牛膝总甾酮的定量分析方法。
关键词 牛膝;总甾酮;分光光度法;含量测定中图分类号:R28412文献标识码:A文章编号:1007-5615(2007)02-0034-02 牛膝(Achyranthes;bidentataBl)又名百倍,鸡胶
骨,为苋科植物牛膝的根。性平,味苦、酸,归肝、肾经。具补肝肾、强筋骨,逐瘀通经,引血下行功效[1]。牛膝中含有甾酮类、三萜类及多糖类成分[2]。其中甾酮是牛膝有效成分,主要有蜕皮甾酮、牛膝甾酮、红苋甾酮等[3]。关于牛膝总甾酮的含量测定方法,文献中鲜有报道[4-6]。本文采用紫外分光光度法测定牛膝中总甾酮含量,现报道如下。1 仪器与试药
供试药材购自药材公司,经安徽中医学院鉴定教研室鉴定,为怀牛膝的干燥根;蜕皮甾酮对照品(广东省同田生化技术有限公司);所用试剂均为分析纯;6010紫外分光光度计(安杰伦);十万分之一电子天平(梅特勒)。2 方法与结果 211 对照品溶液的制备 精密称取干燥至恒重的蜕皮甾酮510mg,加甲醇定容至10mL,制成每毫升含蜕皮甾酮015mg的溶液,即得。 212 供试品溶液的制备 精密称取牛膝粉末(过40目筛)约1g,用50mL80%甲醇超声提取015h,过滤,并以甲醇分次洗涤容器和残渣,置水浴锅上挥干溶剂后,与1g中性氧化铝混匀,以2g中性氧化铝装柱,以乙酸乙酯60mL洗脱,再以乙酸乙酯-乙醇(8∶2vΠv)90mL洗脱,收集乙酸乙酯-乙醇洗脱液,减压回收溶剂,残渣以甲醇溶解,并定容至50mL容量瓶中,摇匀,即得。 213 测定波长的选择 精密吸取对照品溶液015mL,加甲醇定容至5mL。以甲醇溶液为空白,将对照品溶液与供试品溶液于6010型紫外分光光度计上,在220～400nm波长范围内进行扫描。结果对照品溶液与供试品溶液均在243nm波长处有最大吸收,故确定测定波长为243nm。△ 河北省石家庄肾病医院
214 线性关系考察 精密移取对照品溶液013、
014、015、016、017mL,分别加甲醇定容至5mL,摇匀。以甲醇溶液为空白,照紫外分光光度法(中国药
)试验,在243nm波长处测定典2005版一部附录Ⅴ
吸收度。以吸收度为纵坐标,蜕皮甾酮含量为横坐标,绘制标准曲线,线性方程为:Y=010311+010105x,r=019998,结果表明,蜕皮甾酮在0103～0107mgΠmL范围内线性关系良好。 215 精密度试验 精密吸取对照品溶液015mL,5份,分别加甲醇定容至5mL,依法测定吸收度,结果RSD为1176%,说明精密度良好。 216 样品溶液稳定性试验 取样品溶液放置,分别在0、1、2、3、4h取样,依法测定吸收度,计算样品含量,RSD为2115%,说明4h内很稳定。 217 重复性试验 取牛膝粉末2g,共6份,按供试品溶液制备方法制备样品液,分别测定吸收度,计算总甾酮含量,结果测得平均值为21172mgΠg,RSD=2133%,表明该法重复性好。 218 加样回收率试验 精密称取已知含量的牛膝粉末(过40目筛)015g,6份,精密加入蜕皮甾酮对照品适量,照供试品溶液制备方法制备样品液,依法测定吸收度,计算回收率,结果见表1。 表1
加样回收率试验结果 (mg,%)样品量
110671113611022019730193411168实测量2110521169210210141198721237回收率平均回收率RSD951679512196104961411125951949710598153序号加样量111085211085311085411085511085611085 219 样品含量测定 取样品3份,分别照上述供试品溶液制备方法及测量方法测定,计算含量,结果见表2。
2007年 第22卷 第2期河北中医药学报
Vol122 No12 2007JOURNALOFHEBEITCMANDPHARMACOLOGY
・35・
正交设计优选大豆中总异黄酮的提取工艺河北医科大学药学院
3
△△
黄 芸 窦玉红 崔力剑 詹文红(石家庄 050017)
关键词 大豆;正交试验;染料木素;氢氧化钠;总异黄酮;含量测定中图分类号:R28412文献标识码:B文章编号:1007-5615(2007)02-0035-02
大豆是由豆科植物大豆[Glycinemax(L1)Merr1]
的成熟种子,在华北地区分布广泛。大豆可以作为油料经济作物,亦可作为常用中药淡豆豉的原料。大豆含有12种异黄酮,分为游离型的苷元(aglycon)和结合型的糖苷(glucoside)两类[1],经发酵后部分苷转变为苷元[2],两种含量较高的苷元成分为:染料木素
]
(genistein)和大豆素(daidzein)[1。异黄酮具有增强免疫、抗氧化、延缓衰老、改善心功能状态、抗癌等广泛的药理作用[3-7]。对大豆提取工艺的研究应以异黄酮为主。 本实验以大豆中染料木素为质量控制指标,采用正交设计,考察了药材粒度、乙醇浓度、提取次数及提取时间对提取工艺的影响,以优选最佳提取方案。1 材料和方法
λ-2型紫外分光光度计(美国 111 仪器及试剂
PE公司)。染料木素对照品(Sigma公司,含量约为98%)。大豆购自石家庄市乐仁堂药店,经河北医科大学中医学院药用植物教研室教授鉴定为正品。其余试剂均为分析纯。 112 测定程序3 河北省科技攻关计划项目(062772)
河北医科大学青年基金项目(0000060)△ 河北医科大学中医学院(050091) 表2
样品测定结果(n=3)
平均含量(mgΠg)RSD(%)
210
2107
11211 提取工艺
1121111 实验方案设计:用不同浓度的乙醇热回流提取,选用L9(34)正交表进行实验,因素水平安排见表1。 表1
水平
123A(粒度)
因素水平表
B(浓度%)C(次数)
708090123D(时间)1h115h2h豆粒粗颗粒细颗粒(1号筛) 1121112 热回流方法:取符合实验要求的大豆各10
g,精密称定。加试剂80mL浸泡24h后,按正交设计实验方法热回流提取,收集提取液,水浴回收溶剂至干。 1121113 样品溶液制备:热回流提取物,加NaOH(0101molΠL)溶液溶解,定溶为250mL。得供试品液。 11212 提取物中总异黄酮含量测定
[8]
1121211 染料木素标准曲线制作:精密称取120℃干燥至恒重的染料木素1012mg,置50mL容量瓶中,加0101molΠLNaOH溶液定容至刻度,摇匀。精密吸取此溶液015、110、210、310、410mL分别置于100mL容量瓶中,加0101molΠLNaOH定容至刻度,海科学技术出版社,19991483-497[2] 黄泰康1常用中药成份与药理手册[M]1北京:中国
中医药科技出版社,199711419-1427
[3] 孟大利,李锐1中药牛膝化学成分和药理活性的研究
进展[J]1中国药物化学杂志,2001,11(2):120-124
[4] 王龙,胥秀英,郑一敏,等1紫外分光光度法测定牛
膝总甾酮含量[J]1时珍国医国药,2005,16(1):18-19[5] 张翠英,梁生旺,张广旺1不同产地牛膝中蜕皮甾酮
的含量测定[J]1中国中药杂志,2001,36(10):699-699[6] 高晓燕,王大为,李发美1牛膝中脱皮甾酮的含量测
定及促成骨样细胞增殖活性[J]1药学学报,2000,
(2007-04-08 35(11):868-868收稿)
序号总甾酮含量(mgΠg)
1
233 讨论
21135
2108421049牛膝作为常用中药,文献中少有总甾酮含量测定方法报道。本实验采用紫外分光光度法测定牛膝总甾酮的含量,稳定性、精密度、重现性和加样回收率均较好,方法简便、灵敏、可靠,可用于牛膝的质量控制。
参考文献
[1] 中国中医药管理局编委会1中华本草[M]1上海:上