大肠菌群检验方法及操作方法
1、 什么是大肠菌群：指一群需氧及兼性厌氧，在37℃能分解乳糖产酸、产气的革兰氏染色阴性无芽胞杆菌。 2、大肠菌群的组成：大肠埃希氏菌属、柠檬酸杆菌属、产气克雷伯氏菌属和阴沟肠杆菌。 3、大肠菌群的测定意义
粪便污染的指标菌：大肠菌群或粪大肠菌群 以大肠菌群作为粪便指标菌原因： 1) 在粪便中数量最大；
2) 在外环境中存活的时间与致病菌大体相同； 3) 检测方法简便容易。 大肠菌群的测定意义： 1) 判断食品中否受到粪便污染。
2) 有利于控制肠道传染病的发生和流行。
3) 有利于控制食品在生产加工、运输、保存等过程中的卫生状况。
4、大肠菌群的生物学特性
1 形态与染色：革兰氏染色阴性，无芽胞杆菌。 2 发酵乳糖产酸产气
3 培养特性：在EMB琼脂上的典型菌落:呈深紫黑色或中心深紫色，圆形，稍凸起，边缘整齐，表面光滑，常有金属光泽；
4 在麦康凯琼脂上的典型菌落：呈桃红色或中心桃红、圆形，扁平，光滑湿润。
5、大肠菌群检验方法及操作方法 国家标准：
三步法：乳糖胆盐发酵试验→分离培养→证实试验(乳糖发酵试验) 行业标准：
两步法：推测试验→证实试验
表1 大肠菌群在几种常用分离培养上的菌落特征
MPN法简介 Most Probable Number Method最大可能数 • 对样品进行连续系列进行稀释，加入培养基进行培养，从规定的反应呈阳性管数的出现率，用概率论来推算样品中菌数最近似的数值。
• MPN检索表只给了三个稀释度，如改用不同的稀释度，则表内数字应相应降低或增加10倍。
6、粪大肠菌群的检验
• 粪大肠菌群：系一群需氧及兼性厌氧，在44.5℃培养24h内能发酵乳糖产酸产气和分解色氨酸产生靛基质的革兰氏阴性无芽胞杆菌。
• 于LST中36℃培养48h内产气，并于EC内培养44℃ 24h产气的一群细菌；在胰蛋白胨肉汤中于44.5℃，24h内产生吲哚的耐热大肠菌群。 检验方法：
7、检验注意事项
1）从制备样品匀液至稀释完毕,全过程不得超过15min。 2）对产酸但未看到气泡的乳糖发酵，用手轻打动试管，如有气泡沿管壁上浮，应考虑可能有气体产生，应作进一步
试验。
3）挑选菌落进行证实试验时，最少要挑2个以上的典型菌落或非典型菌落进行接种。
4）不可用其他胆盐代替指定的胆盐。 8、大肠菌群快速检验 食品大肠菌群快速检验方法：
• TTC显色法 DC试管法 纸片法 （一）食品饮料大肠菌群快速检验纸片 使用方法： 1.样品稀释同国标法 2.接种
饮料和饮用水采用原液、1:10、 1:100三个稀释度 固体食品采用1:1 、1:10和1:100三个稀释度。 用1亳升灭菌吸管吸取1亳升同一稀释度的稀释液均匀涂布到袋中的纸片上，做三个重复。 3.培养
将接种好的纸片轻轻压平（可叠放），在36℃下培养15
－24h观察结果。 4.结果判定
纸片上出现紫红色斑点,其周围有黄圈者,为阳性. 纸片为一种着色,无菌落生长者为阴性.
纸片呈紫兰色,有紫红色斑点，其周围地黄圈者阴性. 酸性食品接种后,纸片变黄,经培养后无紫红色斑点为阴性
（二）餐具大肠菌群快速检验(纸片法) 使 用 方 法 ：
1.采样6-10份：碗、盘、杯等每份贴纸片两张，用无菌生理盐水湿润纸片后，立即贴于食具内侧表面，30秒后取下，置于原塑料袋内。筷子以5只为一份样品，用吸管吸取生理盐水湿润纸片后，立即将筷子进口端（约5cm）抹拭两张，放入原塑料袋内。
2.将已采样的纸样置于37°C培养15小时：纸片在黄色背景上出现红色斑点为阳性，纸片在紫兰色背景上呈现红色斑点，但周围没有黄晕均为大肠菌群阴性。同一份样品两
张纸片均是阴性为合格。 （三）水的大肠菌群检验
1、水样的采集
1）自来水（未含氯）：龙头火烧灭菌，畅流5—10′后取样。 2）地面水源水：江湖河，水库，水池等。浸入水下20cm下取样。水井50cm下取样。
3）漂白粉处理的水样：自来水，游泳池水，应在瓶内加入0.03g硫代硫酸钠/500ml，或2ml 1.5%硫代硫酸钠液/500ml，除氯。
4）运送：2小时内送到检验室。6-10℃，<6h,立即检验. 5）检验前：将水样振摇5-10分钟。
2、生活饮用水或食品生产用水的检验（大肠菌群 ）
3、瓶装矿泉水的检验 （大肠菌群 ）
4、水源水的检验 接种量
严重污染水：1、0.1、 0.01、 0. 001ml各1份 总量：1.111ml
中度污染水：10、 1、0.1、 0.01ml各1份 总量：11.11ml
轻度污染水：100、 10、 1、0.1ml各1份 总量：
111.1ml
大肠杆菌与非大肠杆菌生化鉴别如下
• 如出现上表以外的生化反应类型，表明培养物可能不纯，应重新划线分离，必要时做重复试验。