http://www.solarbio.com可溶性淀粉合成酶试剂盒使用说明分光光度法注意：正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定货号：BC1850规格：25管/24样产品说明：SSS（EC2.4.1.21）通常以游离态存在于质体基质中，催化淀粉链延长，主要负责支链淀粉的合成。SSS催化ADPG与淀粉引物(葡聚糖)反应，将葡萄糖分子转移到淀粉引物上，同时生成ADP，在反应体系中添加的丙酮酸激酶、己糖激酶和6-磷酸葡萄糖脱氢酶依次催化NADP+还原为NADPH，NADPH生成量与前一步反应中ADP生成量呈正比，340nm下测定NADPH增加量即可计算SSS活性。需自备的的仪器和用品紫外分光光度计、水浴锅、台式离心机、移液器、1mL石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。产品组成：提取液：液体30mL×1瓶，4℃保存；液体一：7mL×1瓶，4℃保存；液体二：4mL×1瓶，4℃保存；液体三：8mL×1瓶，4℃保存；粉剂一：1支，4℃保存；粉剂二：1支，4℃保存；粉剂三：1支，-20℃保存；粉剂四：1支，4℃保存；http://www.solarbio.com粉剂五：1支，4℃保存；粉剂六：1支，-20℃保存；粉剂七：1支，-20℃保存；粉剂八：1支，4℃保存；粉剂九：1支，4℃保存；粉剂十：1支，-20℃保存；试剂一：液体×1支，-20℃保存；临用前加入250μL蒸馏水，充分溶解备用，用不完的试剂4℃保存；试剂二：粉剂×1支，-20℃保存；临用前加入250μL蒸馏水，充分溶解备用，用不完的试剂4℃保存；反应液Ⅰ的配制：临用前取液体一、粉剂一、粉剂二和粉剂三各一支，依次把粉剂一、粉剂二和粉剂三转移到液体一中混合溶解。反应液Ⅱ的配制：临用前取液体二、粉剂四、粉剂五、粉剂六和粉剂七各一支，依次把粉剂四、粉剂五、粉剂六和粉剂七转移到液体二中混合溶解。反应液Ⅲ的配制：临用前取液体三、粉剂八、粉剂九和粉剂十各一支，依次把粉剂八、粉剂九和粉剂十转移到液体三中混合溶解。操作步骤：一、粗酶液制备按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液），进行冰浴匀浆。10000g4℃离心10min，取上清，置冰上待测。二、测定步骤1、分光光度计预热30min以上，调节波长至340nm，蒸馏水调零。2、在EP管中按顺序加入下列试剂http://www.solarbio.com试剂名称（μL）测定管样本150反应液Ⅰ270混匀，30℃保温20min，置沸水浴中1min（盖紧，防止水分散失），冰浴冷却反应液Ⅱ150混匀，30℃保温30min，置沸水浴中1min（盖紧，防止水分散失），冰浴冷却，10000g25℃离心10min，取上清液上清液450反应液Ⅲ300试剂一10试剂二10混匀后立即在340nm波长下记录初始吸光度A1和2min后的吸光度A2，计算ΔA=A2-A1。注意：反应液Ⅰ如有沉淀，加入之前要使之充分溶解混匀。三、SSS活性计算1、按样本蛋白浓度计算：单位的定义：每mg组织蛋白每分钟催化产生1nmolNADPH定义为一个酶活力单位。SSS（nmol/min/mgprot）＝[ΔA×V反总÷（ε×d）×10]÷(Cpr×V样)÷T×稀释倍数=522×ΔA÷Cpr9
http://www.solarbio.com此法需要自行测定样本蛋白质浓度。2、按照样本鲜重计算单位的定义：每g组织每分钟催化产生1nmolNADPH定义为一个酶活力单位。SSS活性（nmol/min/g鲜重）=[ΔA×V反总÷（ε×d）×10]÷（V样÷V样总×W）÷T×稀释倍数=522×ΔA÷WV反总：反应体系总体积，5.7×10-4L；ε：NADPH摩尔消光系数，6.22×103L/mol/cm；d：比色皿光径，1cm；V样：加入样本体积，0.15mL；V样总：加入提取液体积，1mL；T：反应时间，2min；稀释倍数：1.71；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量。9